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실험실 및 환경샘플 내의 세포수를 정량하는 고효율 방법

전문가 제언: ○ 액체에서 세포수를 세는 것 또는 물에서 박테리아 수를 신속히 그리고 정확히 정량하는 방법은 의약품 생산에 그리고 우주비행에 공급되는 소지품의 분석 등에 필요하다. 또 혈액에서 세포수를 세는 것은 질병치료 및 예방에 아주 중요하다. 즉, 임상 샘플에서 인간 면역결핍 바이러스(HIV+)를 가진 환자를 모니터링 하는데 CD4+, CD8+ T-림프세포를 세는 것이나 혹은 자가이식 후보 환자에서 CD34+ 조혈간세포 및 전구세포를 세는 것, 수혈용으로 백혈구가 제거된 혈액에 잔여 백혈구를 세는 것 등은 임상에서 필수적인 절차이며 현재 잘 정립된 기술이다.

○ 환경상태를 평가하기 위하여 해양 박테리아 농도를 결정하는 것, 즉 박테리아 수를 파악하는 것은 기본적으로 필요한 정보이다. 또한 미생물 세포들을 배양하지 않고 낮은 농도에서 세포수를 세는 것은 미생물 생태학과 수질평가에 아주 중요한 기술이다. 그러나 에피 형광 현미경을 이용하는 표준 절차인 직접 세기는 지루하고 작업자에 따라 그 수가 각각 다를 수 있다. 본 특허에서 언급한 SYBR Gold DNA 염색을 사용한 벌크형광이 담수, 해양 및 강가 수계에서 미생물 수를 신속히 추산할 수 있다.

○ 이 핵산 염료 SYBR Green I 기술을 박테리아 수가 적은 여러 수계에서 고체상 레이저 세포 수 측정기에 이용하는 것이 검토되었다. 결과는 30분 내에 얻어졌으며 R2A 우무 플레이트를 14일간 실내온도에서 배양하여 얻은 수와 같거나 더 우수하였다. 이 기술은 ml 당 ~105의 차이도 구별할 수 있다. DNase I로 처리하면 자유 DNA에 의한 배경잡음을 낮추어 민감도를 높여준다. 이 기술은 간단하고 빠르며 경제적이고 또한 물 샘플에 미생물 수를 자동으로 추산하게끔 적용할 수 있다.

○ 본 특허는 상기기술을 토대로 샘플 내의 박테리아와 미생물 수를 정량적으로 셀 수 있는 휴대용 키트 및 방법을 제공한다. 이 키트를 이용한 고효율 분석방법은 샘플 내에 낮은 농도의 미생물의 수를 측정할 수 있어 생물학전 방어에서 미생물 탐지(탄저균 등) 및 농업, 환경평가에 사용될 수 있을 것이다.

저자: SAN DIEGO STATE UNIVERSITY RESEARCH FOUNDATION
자료유형: 특허정보