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생체분자의 1분자 형광 이미징

전문가 제언: ○ 하나의 분자를 계측하는 것은 기술적으로 그리 쉽지 않으며 1분자 계측 시에는 단 1회만의 측정으로는 불충분하며, 적어도 수회 측정하여 통계적인 해석이 필요한 경우가 있다. 또한 평균치에서 1분자의 기능을 추정하기 위해 생물분자운동의 힘 발생이나 콜레스테롤 산화효소 등의 효소작용도 감안해야만 보다 올바른 1분자 계측을 수행할 수 있다.

○ 조명 여역을 작게하는 방법으로 이용되는 에버네센트 장(Evanescent field)을 발생시키는 가장 간단한 방법은 전반사를 이용하는 방법으로 높은 굴절률의 매질인 유리에서 낮은 굴절율의 매질인 수용액에 임계각 이상으로 빛을 입사시키면 전반사가 일어나고 낮은 굴절률의 매질 계면 근방에 에버네센트 장이 생성된다.

○ 에버네센트 장은 계면 바로 근방밖에는 조명되지 않으므로 배경광을 억제할 뿐만 아니라 형광 표식된 생체분자가 국소 여기가 될 수 있다는 장점이 있음으로 전반사에 의한 에버네센트 조명은 유리 근방만을 조명하는 데 유효하지만 2차적으로는 국소 여기를 실현할 수 없기 때문에 브라운운동을 하는 형광분자가 배경광이 되어야 하며 1분자의 형광분자를 보기 위해서는 용액 중에 분자농도를 50nM 이하로 제한할 필요가 있다.